western blot 一抗孵育,为什么不可以将一抗和分析的蛋白样品一起先孵育,后page 电泳,这样更节约一抗?

来源：学生作业帮编辑：灵鹊做题网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/02 18:32:48

在SDS-PAGE电泳前,一般样品加入上样缓冲液中并煮沸5~10分钟,让蛋白样品变性并带上一定电荷,使蛋白迁移速度只与分子量相关,这样才能将不同的蛋白通过电泳尽量的区分开来.这个过程中,会打断一些分子间的相互作用,包括抗体和蛋白样品间的相互作用,也许是没人这么做的原因.
再问：谢谢，我想也是，不过每次上样前样品都要煮吗？也就是我前面煮过的，在冰箱中放置了2~3后，再次上样，还需煮吗？

western blot 一抗孵育,为什么不可以将一抗和分析的蛋白样品一起先孵育,后page 电泳,这样更节约一抗? western封闭膜以后,不能马上孵育一抗,把膜放在4度环境下,2天, western blot的一抗和二抗是如何作用的? western blot里面蛋白变性,那么这样的蛋白失去了活性,为什么还能和抗体蛋白结合? 一直觉得很奇怪,为什么母鸡不受精也能下蛋,这样下的蛋明显是不能孵育出小鸡,不是很浪费能量吗,对鸡来说没有什么好处啊 iNOS蛋白表达量的western blot测定：一抗:NOSII型鼠单克隆抗体,这个抗体应该是谁抗谁?有直接卖的吗? western blot中选择什么厂家的一抗比较好,根据什么选择的? western blot的一抗、二抗可以重复用么?一般可以用几次? 用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而 western blot的条带分析 western blot和elisa用的二抗相同为什么显色液不同为什么同样的蛋白在两次western blot检测中蛋白量相差那么大啊?