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我做逆转录时选用随机引物,那么做cDNA扩增时的特异性引物怎么获取呢?

来源：学生作业帮 编辑：灵鹊做题网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/07/01 01:50:19
我做逆转录时选用随机引物,那么做cDNA扩增时的特异性引物怎么获取呢?
我做逆转录时选用随机引物,那么做cDNA扩增时的特异性引物怎么获取呢?
还是一样的设计引物啊 随机引物反转录只是保证了那些不是以polyA结尾的mRNA也能被反转录而已
再问： 对啊，我就是想得到mRNA，那反转录的mRNA我不知道序列，是不是要先测序一下，再根据序列设计引物扩增？
再答： 你都不知道序列扩增个啥 怎么测序 反转录是所有的mRNA都反转录了 没有单克隆怎么测序 你把你要做的实验从头说下的好 根本不是你想的那么回事 不知道序列就去NCBI上查序列
再问： 是这样的，我做的是细菌，我不知道他的序列，现在就是有点盲目！我现在要找的蛋白呢GENBANK上来源是人，那基因差别可大了。所以啊，我想从RNA入手，再做克隆啊
再答： 那就NCBI上找细菌的那个蛋白的序列呗
再问： NCBI上没有我要的那个细菌的蛋白，有其他细菌的，那我接下来应该怎么做呢？
再答： 用其他细菌的序列设计引物看能不能扩增出来
下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好 我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢 PCR扩增时为什么需要引物呢? 针对mRNA上的某个基因设计逆转录PCR的引物,逆转录时得到的cDNA只是这个基因的cDNA吗? PCR扩增时引物的位置 做PCR时,怎么设计引物? 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列? PCR扩增 正向引物,反向引物是什么?怎么结合的? 测序结果怎么找不到我的扩增引物序列? PCR引物的问题PCR时,单引物可以扩增模板吗? 反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,这是为什么呢? 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列